1.青海發(fā)光桿菌菌種制作
液體母種的制作也有較多方法，我一般就是用小木屑加其他營(yíng)養(yǎng)料，用錐形瓶培養(yǎng)。此環(huán)節(jié)比固體菌種培養(yǎng)要更仔細(xì)一些，特別注意細(xì)菌的監(jiān)測(cè)，菌種環(huán)節(jié)一定要把握好。
2.培養(yǎng)液的滅菌環(huán)節(jié)
此環(huán)節(jié)要嚴(yán)格按照操作規(guī)程，把握好每一步，確保培養(yǎng)液滅菌*。期間注意的是，培養(yǎng)液不能加太滿，否則放氣的時(shí)候，液體從放氣閥沖出。個(gè)人建議在放氣閥上再安裝一個(gè)逆止閥，避免停電。
3.接種環(huán)節(jié)
接種環(huán)節(jié)也是很重要的環(huán)節(jié)，我們一般是將母種先鉤出來(lái)放到另一個(gè)裝有蒸餾水的大錐形瓶中，然后再倒入培養(yǎng)罐。哥哥環(huán)節(jié)必須有大火保護(hù)，否則容易感染。
4.培養(yǎng)環(huán)節(jié)、監(jiān)測(cè)青海發(fā)光桿菌純度（zui重要環(huán)節(jié)）
個(gè)人認(rèn)為此環(huán)節(jié)是液體菌種培養(yǎng)的中心環(huán)節(jié)，也是zui重要的環(huán)節(jié)。培養(yǎng)菌種嚴(yán)格按照操作規(guī)程，注意每個(gè)細(xì)節(jié)。
（1）空氣過(guò)濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管要一起提前滅菌，建議在空氣過(guò)濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管間安裝一個(gè)逆止閥，防止培養(yǎng)液倒流，這是很關(guān)鍵的，否則培養(yǎng)時(shí)因?yàn)閮?nèi)外壓力差變化，培養(yǎng)液容易回流。
（2）監(jiān)測(cè)菌種純度。這一步是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，此步驟將直接決定你的成敗，監(jiān)測(cè)不好可能會(huì)導(dǎo)致全軍覆沒(méi)。監(jiān)測(cè)菌種純度有以下幾種方法：
a.看：看培養(yǎng)液是否透明澄清，菌球是否均勻。培養(yǎng)液不能渾濁。用試管或錐形瓶，從下面接出少量液體（注意，一定要在大火焰的保護(hù)下進(jìn)行），觀察菌球是否懸浮，不能在短時(shí)間內(nèi)下沉或上浮。
b.聞：聞放氣閥處是否有菌絲的純香，不能是其他酒精味、酸味甚至惡臭，要回辨別霉菌和細(xì)菌感染時(shí)不同的氣味。
c.顯微鏡觀察：顯微鏡觀察一些霉菌的特征，平時(shí)可以將已經(jīng)確定的液體菌拿來(lái)觀察練習(xí)，借助一些教材，對(duì)比觀察，這是經(jīng)驗(yàn)累積才能確定的，但也是*的。顯微鏡具體使用方法本論壇有介紹。
d.培養(yǎng)監(jiān)測(cè)：這一步是zui簡(jiǎn)單也是zui直觀的，直接反應(yīng)了該菌種是否純凈。具體操作如下：提前做好試管或錐形瓶瓊脂培養(yǎng)基，并提前做好滅菌工作，再用此小錐形瓶或試管，在培養(yǎng)罐的下面放料處，接少量的培養(yǎng)液（這一步兩人操作，一個(gè)人負(fù)責(zé)火焰保護(hù)，一個(gè)人負(fù)責(zé)接液體），整個(gè)過(guò)程在火焰的保護(hù)下塞上棉塞。傾斜放置，讓部分瓊脂露出培養(yǎng)液?？刂茰囟?，1-2天即可觀察，霉菌和細(xì)菌都可以盡收眼底，如果有感染，培養(yǎng)罐全體培養(yǎng)液應(yīng)及時(shí)放棄，否則后果很嚴(yán)重。
5.接種環(huán)節(jié)
青海發(fā)光桿菌首先確保液體菌種純凈且旺盛的前提下，再討論接種環(huán)節(jié)。接種也是液體菌種較為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，因?yàn)榫N含水量大，操作中很容易感染空氣中的雜菌。我把我的接種方法透露一下，希望對(duì)您有幫助。接種操作：五人一組，每一組一把接種槍，五個(gè)酒精燈。一個(gè)人專門負(fù)責(zé)接種槍的把握注射菌種，其余四人負(fù)責(zé)打開(kāi)袋口（菌袋用無(wú)棉蓋封口，便于操作）。每人面前一個(gè)酒精燈，酒精燈火焰一定要大，大到可以包圍無(wú)棉蓋口。接種時(shí)，在火焰上打開(kāi)蓋口，在火焰上接種，接完后，在火焰上蓋上蓋口，整個(gè)環(huán)節(jié)要迅速，否則火焰要把菌袋燒壞。接種槍在沒(méi)有用的時(shí)候?qū)⒄麄€(gè)槍頭放在火焰上，避免在空氣中放置。 整個(gè)操作環(huán)節(jié)保險(xiǎn)度*，對(duì)接種室的滅菌要求不高。