傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

K1人甲狀腺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

FAM3B/PANDER： 胰腺衍生因子抗體 RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞 Rattus

HTSMC-c 人類氣管平滑肌細(xì)胞(HTSMC) 500,000cells 原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml 兔子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml

FGF1： 酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體 CM-H048人胃粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

801-D (人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 兔子1(IGF-1)ELISA 試劑盒 IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml

factor VIII： 8/第八/第八因子相關(guān)抗原抗體 大鼠腦膜細(xì)胞(RMC)(5×105)

CL-0467WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠心型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP3)ELISA試劑盒 IAP(Human inhibitor of apoptosis)  人細(xì)胞凋亡抑制因子 96T

Phospho-MYPT1 (Ser507)： 0酸化肌球蛋酸酶抗體 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32

NCI-H358(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12(腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞) 大鼠心肽(ANP)ELISA試劑盒 BMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4)  小鼠骨成型蛋白4 96T

Phospho-MYPT1 (Ser668)： 0酸化肌球蛋酸酶抗體 家貓肺細(xì)胞;FCA-L1

IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠心0脂抗體IgA(ACA IgA)ELISA試劑盒 Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3  植物25羥基維生3 96T

K1人甲狀腺癌細(xì)胞Phospho-HSL (Ser660)： 0酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 THY1 Others Mouse 小鼠 THY1 / CD90 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

犬腎細(xì)胞;MDCK/IgR 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)ELISA 試劑盒 Ezrin/Radixin 埃茲蛋白(多肽) 0.5mg

HURP： 肝癌上調(diào)蛋白抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9402

MA-782(小鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)ELISA 試劑盒 F1 operon positive regulatory protein(NT) 鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端多肽) 0.5mg

Hrasls3： HRAS樣抑制因子3抗體 胎牛血清FBS